《北京大学医学实验系列教材·生物化学与分子生物学实验教程》是在编者多年使用的本科生及研究生生物化学与分子生物学实验讲义的基础上,经修订和改编而成。根据学科发展,在原有实验讲义的基础上,删去了部分验证性实验,增加了一些反映最新进展的实验技术。《北京大学医学实验系列教材·生物化学与分子生物学实验教程》包括总则、基本实验和高级实验三部分。总则介绍生物化学与分子生物学实验操作基本要求以及常用仪器的使用与维护。基本实验包括蛋白质分离与纯化、酶学实验和核酸提取与分析。除了常规经典的生化分析技术,新增了SDS-PAGE、等电聚焦电泳、DNA重组与鉴定、PCR等分子生物学热门技术,
基本介绍
- 书名:北京大学医学实验系列教材•生物化学与分子
- 出版社:北京大学医学出版社
- 页数:122页
- 开本:16
- 品牌:北京大学医学出版社
- 作者:倪菊华 梁静
- 出版日期:2008年5月1日
- 语种:简体中文
- ISBN:9787811165579, 7811165570
内容简介
图书目录
实验室规则
基本操作
常用仪器简介
基本实验
蛋白质分离与纯化
实验一 血清的盐析及含量测定
实验二 凝胶过滤层析
实验三 醋酸纤维素膜电泳
实验四 聚丙烯醯胺凝胶电泳(SDS-PAGE)
实验五 等电聚焦电泳
酶学实验
实验一 底物浓度对酶促反应速度的影响
实验二 酶浓度对酶促反应速度的影响
实验三 pH对酶促反应速度的影响
实验四 温度对酶促反应速度的影响
实验五 抑制剂对酶促反应速度的影响
实验六 乳酸脱氢酶粗提液的製备及活力测定
核酸提取与分析
实验一 质粒DNA的微量快速提取
实验二 质粒DNA的酶切与鉴定
实验三 DNA重组与鉴定
实验四 聚合酶链反应技术(PCR)
高级实验
实验一 生肌蛋白的诱导表达和提取
实验二 蛋白质免疫印迹分析(Western Blot)
实验三 免疫共沉澱
实验四 GST pull-down分析
实验五 肝细胞总RNA提取及鉴定
实验六 RT-PCR技术
实验七 探针标记
实验八 Southern Blot
实验九 Northern Blot
实验十 电泳迁移率变动分析(EMSA)
附录 化学试剂的规格与保管
主要参考文献
文摘
蛋白质分离与纯化
蛋白质是一切活细胞和有机体的重要组成成分。细胞和体液中蛋白质都是成千上万种相混合而存在,要分析单个蛋白质的结构和功能需先分离纯化蛋白质。通常利用蛋白质的两性解离、等电点、紫外吸收等理化性质,採取盐析、电泳、层析等方法对蛋白质进行分离、纯化。蛋白质分离、纯化过程一般可分为以下几个步骤:
(一)材料的预处理及细胞破碎
分离提纯某一种蛋白质时,首先要把蛋白质从组织或细胞中释放出来,并保持其天然状态及活性。因此要採用适当的方法将组织和细胞破碎。常用的破碎组织细胞的方法有:①机械破碎法,可使用高速组织捣碎机、匀浆器、研钵等设备;②渗透破碎法,即在低渗条件使细胞溶胀而破碎;③反覆冻融法,生物组织经冻结后,细胞内液结冰膨胀而使细胞胀破;④超音波法,使用超音波振荡器使细胞破碎;⑤酶法,用溶菌酶破坏微生物细胞等。
(二)蛋白质的抽提
通常选择适当的缓冲液将蛋白质提取出来。抽提所用缓冲液的pH、离子强度、组成成分等条件的选择应根据欲製备的蛋白质的性质而定。如膜蛋白的抽提需加入表面活性剂(十二烷基磺酸钠、TritonX-100等),使膜结构破坏,利于蛋白质与膜分离。在抽提过程中,应注意在低温下操作,避免剧烈搅拌等,以防止蛋白质的变性。
序言
是为序。
韩启德
二零零八年四月二十九日