从2000年开端的新系列。以《神奇蜘蛛侠》为底本，重新开端蜘蛛侠的故事。

动画版讲述彼得·帕克被神盾局长尼克·弗瑞看中，请求他带领新复仇者小队（冲击，铁拳，力王，飞虎），蜘蛛侠也被换上了更先进的装备。不过麻烦也更多了，除了号角日报的声讨，队友不和，和玛丽的情感问题，在学校里被詹森欺负外，八爪鱼博士以及绿魔也在暗中策划着名什幺……不过这些只是一次又一次地验证了紧身衣和彼得的智商而已。

蜘蛛看点多多！小蜘蛛各种萌各种可爱，话唠属性点满，虽然是戴着面具的脸，但表情之丰富造型之有趣实在是少见，非常非常好玩！

故事是小蜘蛛成名以后，被尼克·弗瑞(Nick Fury)招揽，加入了神盾局（S.H.I.E.L.D.)。对于各路大英雄来说小蜘蛛实在是渺小，于是招待他的是各种锻鍊测试，务求让他成为终极-蜘蛛侠(Ultimate Spider-man)。

虽然戏份更多的是同队的铁拳(Iron Fist)，飞虎(WhiteTiger)，力王（Powerman)，冲击(Nova)，但是从第五集开始，钢铁侠(Iron man)、绿巨人浩克(The Hulk)、雷神索尔(Thor)、金刚狼(Wolverine)、末日博士(Doctor Strange)、鹰眼（hawkeye)、石头人(the thing)、银河护卫队Guardians Of The Galaxy )、刀锋战士(blade)、死侍(deadpool)纷纷登场，真是热闹非凡。

编剧：Jacob Semahn　Danielle Wolff　Paul Dini　Joe Kelly　Joe Casey　Steven T. Seagle

主演：德雷克·贝尔 Drake Bell　斯蒂文·韦伯 Steven Weber　J·K·西 斯 J.K. Simmons

原名彼得帕克，再一次参加奥斯本集团举行的科技展中意外被一只变异蜘蛛咬伤，从而获得了蜘蛛一般的特殊能力，与其他关于蜘蛛侠的作品不同，本片中的小蜘蛛再也不是以前的那个独行侠了，他也有了自己的队友，并有了自己的高科技装备，而更加独特的是，我们的小蜘蛛竟然可以打破第四堵墙与影片之外的观众进行对话。

能力：拥有蜘蛛一般的力量，速度，灵敏度，对危险快速做出反应的蜘蛛感应，但不像蜘蛛那样自由射网，但他靠着自己的智慧发明并命名为“蛛网发射器”的装置射出蜘蛛丝，在加入神盾局后装置获得了改进，能射出质量更高的网和电击网

原名丹尼尔.兰德，一位来自崑仑的格斗高手，通过了不朽的龙——Shou-Lao的考验获得了获得了钢铁般的拳头以及铁拳的称号，并将成为下一任崑仑王，长老给了他一年的时间与外界告别，但他却选择加入神盾与邪恶作斗争，在第二季，铁拳将重返崑仑，接受王的使命，长老却被他的成长和与蜘蛛侠等伙伴的感情所感染，决定再给他一年时间与外界告别

能力：在崑仑修炼多年使他成为了一名格斗高手，其力量、速度敏捷以及神经反应都得了空前的提高，而通过寿老的考验，让他获得了一个钢铁一般的拳头，足以击碎一切目标，第二季，铁拳被蝎子激怒，激发了内心的力量，从而获得了第二个“铁拳”

Ava Ayala，继他爷爷和父亲之后的第三代“白虎”，力量来源是家族的白虎护身符，父亲死后继承了它，获得了白虎的力量，死敌是猎人克拉文，因为他杀死了自己的父亲。

能力：有敏捷的速度和超强的跳跃力，以及自由伸缩的锋利指甲，加入神盾局后，得到了电爪

本名卢克凯奇，父母均为神盾局的科学家，他们发明了一种血清，能够使人获得超人般的力量，再一次飞机失事中，凯奇的父母为了让他活下去，把血清给凯奇喝下并将他退下推下飞机，靠着血清赋予的力量，卢克凯奇活了下来并成为了神力侠，第二季中，我们会发现凯奇的父母并没有死亡，而是被天蝎骗到了十二宫成为了那里的研究人员，而他们的工作就是複製那种特殊的血清。

能力：血清赋予了它超强的力量以及坚不可摧的皮肤。

萨姆.亚历山大，新星军团最后的成员，他的头盔具有强大的力量，曾为银河守护者的议员，之后退出并成为了神盾局的一员(貌似他不怎幺喜欢长期与外星生物在一起生活），第三季银河守护者特辑中，新星激发了头盔的力量升级为黑色头盔，力量也得到加强，蜘蛛侠称其为“终极新星”

能力：高速飞行，能量光束，以及全身发出强烈光芒（但会消耗大量能量）其能力由新星头盔提供，头盔升级后，力量也获得了增强。

神盾局局长，具有极强的领导能力和个人行动能力，除漫画以外，曾出现在漫威多个影视作品中，在漫画原着中（616宇宙），尼克弗瑞是个白人，但本片中它的设计则更贴近于终极世界（1616宇宙）和电影世界（199999宇宙），为黑人形象，招募了以蜘蛛侠为主的新一批年轻英雄并对他们进行指导。

神盾局第8级特工，尼克弗瑞的重要助手，动画组为了更好的配合蜘蛛侠等人的活动，成为了彼得所在高中的校长，并以极快的速度将学校和彼得的家改造成为具有多种机关密道和高科技的神秘基地
　　斯坦·李（Stan Lee）

尼克弗瑞安排在学校的秘密特工，神盾局元老级成员，平时在学校担任保洁员工作，秘密监视学校发生的一举一动，第二季十五集，他帮助彼得帕克和他的两个朋友（玛丽简和哈利奥斯本）对付蜥蜴博士（科特·康纳斯），而在此前，蜘蛛侠并不知道他的身份

熟悉漫威的朋友们应该都知道，本片中的斯坦李原型正是漫威众多着名人物的创造者（包括蜘蛛侠，钢铁侠，x战警，神奇四侠，绿巨人..........）也是神盾局的创造者之一，他本人也正是漫威电影的客串之王，几乎所有的漫威电影和动画他都有几秒钟的戏份，不过我们的斯坦李老爷子像这样长期在一部作品中打酱油并有一集专场戏份貌似还是第一次。